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質粒DNA色譜分析、分離的推薦選擇！
發布時間：
2022-10-20 11:15
質粒DNA色譜分析、分離的推薦選擇！
使用TSKgel和TOYOPEARL?助力質粒載體關聯治療藥物的研發
盡管在新品快訊（TSKgel?、TOYOPEARL?）No. 15中，介紹了在分析、分離純化病毒載體時使用了分析用TSKgel色譜柱以及制備用填料TOYOPEARL的論文和技術資料，但也收到了很多在分析、分離純化質粒DNA時的應用實例報告。目前整理的論文和技術資料如下?！?/p>
● 分析、分離質粒載體時使用的層析分離模式
分離模式 |
分離方法 |
分離機理 |
去除雜質 |
純化步驟 |
備注 |
尺寸排阻色譜(SEC) |
等度分離 |
分子尺寸的差異 |
延遲洗脫 |
初期粗純 |
樣品加載量少， |
陰離子交換色譜(AIEC) |
吸附/梯度洗脫 |
電荷的差異 |
流穿或梯度 |
捕獲 |
可以分離質粒異構體， |
疏水色譜(HIC) |
流穿 |
疏水性的差異 |
疏水性的差異 |
捕獲 |
與AIEC相比， |
Ref.: S. Palmieri et al., BioProcess International, 2011, Lonza webinar, modified
● 使用TSKgel和TOYOPEARL分析、分離質粒載體的實例（文獻、技術資料）
年 |
分離模式 |
色譜柱 |
目標、關鍵詞 |
論文標題 |
2008 |
SEC, IEC, HIC |
TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL, DNA-NPR?, Butyl-NPR |
質粒DNA |
Characterization of Plasmid DNA Samples by Chromatographic Methods |
2007 |
IEC |
TSKgel DNA-NPR |
質粒DNA |
Separation of topological forms of plasmid DNA by anion-exchange HPLC: Shifts in elution order of linear DNA |
2005 |
SEC |
TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL |
質粒DNA |
High-speed chromatographic purification of plasmid DNA with a customized biporous hydrophobic adsorbent |
2004 |
IEC |
TSKgel DNA-NPR |
質粒DNA |
Effective and robust plasmid topology analysis and the subsequent characterization of the plasmid isoforms thereby observed |
2019 |
AFC |
精氨酸固定化 |
超螺旋質粒DNA |
Effect of Chromatographic Conditions on Supercoiled Plasmid DNA Stability and Bioactivity |
2005 |
HIC |
Butyl-650M |
質粒DNA |
Improved downstream process for the production of plasmid DNA for gene therapy |
使用TSKgel陰離子交換色譜柱（AIEC）分離質粒載體的實例
色譜柱：TSKgel DNA-NPR (2.5 μm, 4.6 mm ID × 7.5 cm)
洗脫液： 緩沖溶液A：20 mmol/L Tris-HCl (pH 9.0)
緩沖溶液B：含有1 mol/L NaCl的緩沖溶液A
緩沖溶液B：從50%到65%的10 CV的線性梯度
流速：1 mL/min
檢測：UV (260 nm)
樣品：PUC19 質粒
在純化質粒DNA（載體）時，除了需要去除混入的宿主的基因組DNA和RNA、蛋白質等雜質以外，還需要去除質粒DNA的立體異構體Open circular（oc-）體、Linear體。只純化Supercoiled（closed circular: cc-）體。
● 質粒載體的純化步驟示例
下述層析步驟組合適用于質粒DNA的純化工藝。
· SECà混合模式層析（Thiophilic Interaction Chromatography）àAIEC（A公司）
· HICàAIECàSEC（B公司）
· AIECàHIC（C公司）
· HIC（流穿：FT）àHIC（D公司）
· 其他：固定化金屬螯合親和層析（IMAC）
羥基磷灰石層析
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